LIFIA CITRA R, PENGARUH ION KALSIUM (Ca2+) TERHADAP AKTIVITAS PEKTINASE HASIL ISOLASI DARI Bacillus firmus, Vol 2, No 1 (2014) , http://kimia.studentjournal.ub.ac.id/index.php/jikub/article/view/480

ABSTRAKPektinase merupakan enzim hidrolase yang mampu memecah ikatan α-1,4 glikosidik pada poligalakturonat  menjadi asam galakturonat. Diproduksi dari berbagai macam mikroorganisme seperti Aspergillus  niger dan Bacillus firmus. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh penambahan ion Ca2+ terhadap aktivitas pektinase dari Bacillus firmus dan menentukan parameter kinetika.  Pengaruh ion Ca2+ ditentukan pada  konsentrasi ion Ca2+ 0, 2, 4, 6, 8, dan 10 mM, sedangkan parameter kinetika ditentukan pada variasi konsentrasi  substrat 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; dan 2,5 % (b/v).
Kata Kunci : Bacillus firmus, Ca2+, DNS, pektinase

PENDAHULUAN

Pektinase merupakan enzim yang dapat mendegradasi rantai panjang polimer karbohidrat  yang disebut pektin. Pektin dapat ditemukan pada jaringan tanaman, terutama sayuran dan buah-buahan. Pektin terletak pada lamella tengah dinding sel, pada mulanya berupa proto pektin yang tidak  larut dalam air. 

Sifat pektin seperti gel yang dapat mengokohkan tanamn. Komponen utama penyusun pektin  adalah ramnogalakturonat (RG) dan homogalakturonat (H

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ion Ca2+ terhadap aktivitas pektinase.

METODE PENELITIAN

•Bahan :

•1. kultur murni Bakteri Bacillus firmus

•2. pektin (Merck), kasein (Merck) dan bahan proanalis merk Merck antara lain asam sitrat, natrium sitrat, reagen asam dinitrosalisilat (DNS), dan aquadest.

•

•Alat :

•1. seperangkat alat gelas (Erlenmeyer, gelas

•kimia, labu ukur, pipet tetes, pipet ukur, corong gelas, gelas arloji, spatula)

•2. neraca analitik (Mettler Toledo AL 204), pH meter (Schott Gerate CG 820), pH Universal (Merck), shaker (Edmud Buhler SM 25), bunsen

•3. oven (Memmert), autoclave (Tipe LS-C35L), inkubator

•4. refrigerator, kuvet, Spectronic 20 (Genesys 20), penangas air (Janke-Kunkel), aluminium

•5. foil, kapas, dan kertas saring.

•Penentuan Aktivitas Pektinase dengan Penambahan Ion Ca2+

            membuat larutan uji dengan komposisi 1 mL pektin 1% (b/v), 1 mL buffer sitrat-fosfat pH 7, 1 mL ekstrak kasar pektinase, dan 1 mL aquades. ditambahkan larutan CaCl2 pada masing–masing tabung dengan konsentrasi (0, 2, 4, 6, 8, dan 10) mM sebanyak 1 mL. Pada tabung 1 ditambahkan 2 mL aquades agar  volume semua larutan sama. Diinkubasi selama 55 menit pada temperatur 50 ºC. ditambahkan reagen DNS sebanyak 2 mL, kemudian dipanaskan selama 15 menit pada temperatur 100 ºC.  Larutan didinginkan hingga mencapai temperatur kamar. larutan dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL dan ditambahkan aquades hingga tanda batas. aktivitas pektinase merupakan jumlah asam galakturonat yang terbentuk olek setiap 1 mL pektinase per menit.

•HASIL & PEMBAHASAN

•Hasil isolasi ekstrak kasar pektinase berupa filtrat berwarna coklat kekuningan dan dihasilkan aktivitas pektinase sebesar 0,636 µgmL-1menit-1. Pektinase mampu mengkatalisis pektin menjadi asam galakturonat pada ikatan glikosidik rantai panjang karbon.

•Aktivitas pektinase ditentukan berdasarkan jumlah gula pereduksi yang terbentuk dari 1 mL enzim per menit. Gula pereduksi yang dihasilkan akan mereduksi DNS sehingga dapat membentuk asam 3-amino-5-dinitrosalisilat. Reaksi ini ditunjukkan dengan perubahan warna larutan dari kuning menjadi merah kecoklatan.

Penentuan Parameter Kinetika Reaksi Enzimatis

Ion Ca2+ pada konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 mM dapat meningkatkan aktivitas pektinase. Hal ini mengakibatkan semakin banyak produk yang terbentuk dari pada kompleks enzim-substrat yang terurai kembali menjadi enzim dan reaktan.

KESIMPULAN

•Hasil dari penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa aktivitas pektinase dapat meningkat apabila ditambahkan ion Ca2+ dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 mM.

•Ion Ca2+ merupakan aktivator. Ion Ca2+ dapat berikatan pada sisi aktif enzim sehingga membuat konformasi enzim .

DAFTAR PUSTAKA

1. Cabeza M. S., Baca F. L., Puntes E. M., Loto F., and Baigori M. D., 2011, Selection of

Psychrotolerant Microorganism Producing Cols-Active Pectinases for Biotechnological

Process at Low Temperature, Journal of Food Technology and Biotechnology, 49.2, pp

187–195.

2. Cipolati E. P., Jose M. A. S., Klein M., Feddern V., Manuella M. C. F., Vladimir J. O.,

Ninow J. L., and Oliveira D., 2014, Current Status and Trends in Enzymatic

Nanoimmobilization, Journal of Molecular Catalysis B: Enzimatic, 99,pp 56–67.

3. Winarno, 2010, Enzim Pangan, M. Bio press, Bogor.

4. Rehman H. U., Aman A., Rahmat R. Z., and Ali S. U. Q., 2014, Immobilization of Pectin

Degrading Enzyme from Bacillus Licheniformis KIBGE IB-21 using Agar-agar as A

Support, Pakistan, Carbohydrate Polymers, 102, pp 622-626.

5. Wu R., He B., Zhao G., Qian L., and Li X., 2013, Imobilization of Pectinase Oxidized

Pilp Fiberand Its ApplicatiHasil dari penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa aktivitas pektinase dapat meningkat apabila ditambahkan ion Ca2+ dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 mM.

Ion Ca2+ merupakan aktivator. Ion Ca2+ dapat berikatan pada sisi aktif enzim sehingga membuat konformasi enzim .

on White Water Treatment, Southchina University of

Technology, Guangzhou, China, Carbohydrate Poymers, pp 523-529.

6. Roosdiana A., Prasetyawan S., Mahdi C., and Sutrisno, 2013, Production and

Characterization of Bacillus firmus Pectinase, J. Pure App. Chem. Res. 2, 1, pp 35–41.

7. Wang B., Cheng F., Lu Y., Ge.W., Zhang M., and Yue B., 2013, Immobilization of

Pectinase from Penicillium oxalic F68 Onto Magneticcornsarch Microspheres :

Characterization and Application in Juice Production, Journal of Molecular Catalysis B:

Enzymatic 97, pp 137–143.

8. Voregen A. G. J., Fons F., Hank S., and Richard V., 2003, Advences in Pectinase,

Neetherlands, Klower Academik Publisher.